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构建一个可以检测某一功能信号通路的细胞系，可以有助于解译参与这一信号通路的信号分子。这些工具载体是通过在载体的最小启动子的上游插入多个反应元件重复序列而获得的。 Promega 利用 pGL4 骨架上优化的 luc2 萤火虫萤光素酶基因设计了一系列载体，可对多条通路的活性进行检测。这些载体上还包含一个潮霉素抗性筛选基因，既可用于瞬时转染，也可用于筛选稳定转染细胞系。 我们提供含有三种经过改造的不同萤火虫萤光素酶基因 (luc2、luc2P 或 luc2CP) 的最小启动子载体。 luc2 基因经过改造，去除了大部分隐藏的转录因子结合位点，并通过编码优化提高了在哺乳动物细胞中的表达效率。 luc2P、 luc2CP 和 RapidResponse™ 基因是在 luc2 基因的基础上增加了降解序列，从而可以调控 luc2 基因在细胞中的半衰期。 RapidResponse™ 基因对刺激的响应更快，但是以牺牲信号强度为代价。 luc2P 基因 ( 半衰期为 1 个小时 ) 反应比 luc2 基因 ( 半衰期为 3 个小时 ) 快，信号强度也适合，而 luc2CP 基因 ( 半衰期为 0.4 个小时 ) 反应更快但信号强度最弱。最小启动子载体有含筛选标签 ( 潮霉素 ) 和不含筛选标签的可供订购。为了提高实验效率，一些预设的反应元件载体已经整合到了 pGL4.27 载体中。其中一些载体也可订购其稳定表达的细胞系 (GloResponse™ 细胞系 )。
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询价核受体检测可以通过传统的方法即利用上游带有核受体反应 元件的最小启动子载体来完成。您也可以选择病毒元件像小鼠乳腺 肿瘤病毒长末段重复启动子来检测雄激素或糖皮质激素的响应( 如 pGL4.36)。很多情况下，利用这些方法进行的研究需要选择含有合 适的内源核受体的细胞系，就是说每一种核受体的研究可能需要选 择不同的细胞系。利用酵母双杂交原理的方法也适用于核受体的研 究。核受体配基结合域与 GAL4 DNA 结合域相融合，通过上游含有 GAL4 上游激活序列的重复片段的最小启动子的萤火虫萤光素酶载体 转染至细胞中。配基结合区域会与配基结合形成同源或异源的二聚体， 以及与激活因子或抑制因子相互作用。这种单杂交系统可帮助您在很多细胞系中研究您所感兴趣的核受体。
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