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Nanoluc® 萤光素酶蛋白具有蛋白分子小(16kDa) 和光信号强的特点,使其成为蛋白融合表达的理想伴侣。 Nanluc 融合表达的蛋白可以用于多种应用方向:蛋白稳定性的报告子,细胞成像生物发光 探针,作为蛋白相互作用或蛋白小分子相互作用研究中常用的生物发光能量共振转移技术的供体 (BRET)。 NanoLuc® 蛋白融合表达载体提供两种模式克隆载体,能够轻松 与目标蛋白进行 N 端或 C 端融合, 您可根据需要选择: • pNLF 载体系列:可与全长 Nluc 蛋白生成 N端或 C端融合蛋白,或者可通过传统的多克隆位点 (MCS) 克隆将分泌型 Nluc 蛋白与目标蛋白 N 端融合。 • pF 载体系列:能通过 Flexi® 载体克隆系统生成 Nluc 的 N- 或 C-端融合蛋白—一种定向克隆技术,基于两个稀有酶切位点的限制性内切酶 , SgfI 和 PmeI, 这种技术能够快速,高效,高保真性地在不同 Flexi® 载体间转移蛋白编码区,而无需重新测序。
询价许多信号蛋白参与肿瘤发生和细胞应激反应,其蛋白周转率到严格调控。蛋白质的稳定和随后的积累是随着细胞条件的改变而发生的,从而引起下游转录事件的激活。 NanoLuc®Stability Sensors 中,提供了两种关键信号通路蛋白HIF1A 和 NRF2 分别和 NanoLuc® 萤光素酶融合的融合蛋白载体,以方便研究这两种蛋白在细胞中的稳定性。 HIF1A 载 体 系 统:HIF1A 载体系统可以简单地定量细胞内HIF1A 蛋白水平,以研究这种信号蛋白介导细胞对缺氧应答的动态变化。 系统中提供带有 CMV 启动子的 HIF1A- NanoLuc® 融合蛋白载体(NanoLuc® 位于 HIF1A 的 C 端)和 Carrier DNA,可在细胞内进行融合蛋白的梯度表达。NRF2 载体系统:NRF2 载体系统可以简单地定量细胞内 NRF2蛋白水平,以研究这种信号蛋白介导细胞对氧化应激反应的动力学。系统中提供带有 CMV 启动子的 NRF2-NanoLuc® 融合蛋白载体(NanoLuc® 位于 NRF2 的 C 端)和用于适当调节细胞内 NRF2 水平的 pKEAP2 表达载体以及 Carrier DNA,可在细胞内进行融合蛋白的梯度表达。
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询价基于萤光素酶报告基因的检测系统仍是高通量药物筛选中重要而有效的方法。但是待测化合物与萤光素酶报告基因的相互作用导致的假阳性结果会导致不必要的后续工作。 pNLCoI 载体是第二代双报告基因载体系统,能够从同一个 mRNA 同时表达萤火虫萤光素酶(luc2) 和融合有 PEST 去稳定结构域的 NanoLuc® 萤光素酶 (NlucP)。通过来源于猪捷申病毒 -1(porcine teschovirus-1) 的 P2A 序列能够分别检测两种萤光素酶的表达,其原理是 P2A 序列启动了 ribosomal skip,同一启动子可调控获得两种非融合酶的表达,且两种萤光素酶与化合物相互作用不同。当这种技术用于高通量化合物筛选中时,实现了与其中一个萤光素酶直接作用而导致的假阳性化合物能够与同时引起两种萤光素酶反应的真正的有效化合物区别开来。pNLCoI 与 Nano-Glo®Dual-Luciferase®Reporter (NanoDLR™) Assay System 联合使用,这种检测试剂可以在同一样本中先后检测萤火虫和 NanoLuc® 萤光素酶蛋白。两种试剂均能产生半衰期长达2 小时左右的稳定的辉光信号,适用于批量操作检测样本,或者96、384、1536 多孔板模式下进行筛选。
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