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第一代实验载体现在已经基本停用了,这代载体携带的Promega第一代luciferase基因,该载体几乎未经基因工程改造,载体上的luciferase基因在实验的过程中有很多本底应答,造成背景比较高,现在比较通用的luciferase基因是简写为luc2的基因,去除了很多本底应答。
实验流程a.拿到选好的实验载体后普通转化,做菌种保存,将实验质粒和内参质粒中量提取,为后续转染实验准备好载体。b. 设置好实验对照,将中量提取好的实验质粒与内参质粒用转染试剂E2311共转染到细胞中,转染后24小时将加药,根据药物作用时间可以开始进行检测。
psiCHECK™ -1 和psiCHECK™ -2 载体用于对RNA干扰(RNAi)的早期优化提供快速的定量方法。此载体可监测与报告基因融合的目的基因表达的变化。两种载体都应用海肾萤光素酶作为主要报告基因,目的基因被克隆至海肾萤光素酶翻译终止密码子下游的多克隆位点。由合成的siRNA 或体内表达的shRNA 引发的针对目的基因的RNAi过程,导致融合mRNA 的剪切和随后的降解。