报告基因应用之启动子研究

我们可以提供的产品种类：

1.载体选择：

a.第一代实验载体现在已经基本停用了，这代载体携带的Promega第一代luciferase基因,该载体几乎未经基因工程改造，载体上的luciferase基因在实验的过程中有很多本底应答，造成背景比较高，现在比较通用的luciferase基因是简写为luc2的基因，去除了很多本底应答。

b.第二代实验载体推出后得到了广泛的应用，现在还有很多人在使用，是目前拥有文献最多的载体。这代载体在选择内参载体时依然选用第一代，首选是pRL-TK的质粒，这个质粒所携带的启动子是这三个内参载体中最弱的一个，内参信号较之另外两个更弱一点，更利于实验结果的比较。

c.第三代载体是最先进的载体，在这里我们可以选择是萤火虫做实验载体还是海肾的做实验载体，与之对应的内参载体也有两种可以选择，同时我们第三代载体做了两种，一种不带筛选标价，另一种带筛选标记。带筛选标记的质粒可以做成稳转细胞株，以方便实验进行，不用反复转染细胞。

2.实验流程：

a.拿到购买的质粒后，普通转化实验，做一个菌种保藏，方便以后永久使用购买的载体。将载体复制后即可开始后续实验。

b.载体构建：进行分子克隆，将待研究启动子构建入选好的实验载体，鉴定正确，质粒中量提取，为转染做准备。

c.细胞实验：设置好实验对照，将中量提取好的实验质粒和对照质粒分别与内参质粒按照合适比例（2:1——50:1）用转染试剂E2311共同转染到细胞中，转染后24小时可以开始进行检测。

d.检测流程：如果选用闪光型试剂E1910，E1960，需要去除培养基，洗涤细胞，加入裂解液，至细胞充分裂解，取20ul裂解产物 进行检测，适合样品数量比较少的客户。如果采用辉光型试剂E2920，E2940，只需将检测试剂加入代检孔，等待30分钟即可开始检测，操作比较简单，适合做高通量的客户。