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发布日期：2024-09-29
不正确的细胞复苏方法会导致细胞损伤、活力丧失和细胞特征改变，从而影响研究结果或治疗效果的可靠性和可重复性。通过采用适当的解冻方法，如逐步加热和使用保护剂，可以保持细胞完整性、遗传稳定性和功能特性，从而最大限度地提高
下游应用的效率和成功率。此外，遵循标准化的复苏方法可以最大限度地减少实验变异性，提高可重复性。
Tips
为了获得最佳的复苏效果，可使用BPS Bioscience的经验证和优化的培养基。
收到新的细胞系时，建议扩增细胞并在早期传代时至少冻存10管以备将来使用。
解冻培养基不能含选择性抗生素。
该Protocol适用于贴壁细胞系（如HEK293，CHO或HeLa细胞）。
1.在37°C水浴中旋转冷冻的细胞冻存管约60秒。细胞解冻后（可能略快或略慢于60秒），立即将冻存管内的细胞迅速转移到含有10 ml预热Thaw Medium（不含选择性抗生素）的离心管中。如果将细胞长时间留在37°C的水浴中会导致活力迅速丧失。
步骤1的替代方法：解冻后立即将冻存管的细胞快速转移到一个空的50 ml锥形管中，然后慢慢滴加10 ml预热的Thaw Medium，同时轻轻摇动锥形管，以实现温和混合，避免渗透冲击。
2.立即以300 g离心5分钟，去除培养基，并将细胞重悬于5 ml预热的Thaw Medium中（无选择性抗生素）。
3. 将重悬的细胞转移到一个T25瓶或T75瓶中，并在37°C、5% CO2的培养箱中孵育。
4. 培养24小时后，检查细胞附着和活力。更换为新鲜解冻培养基，并继续在37°C、5% CO2的培养箱中培养，直到细胞准备好传代。
5. 细胞应在完全融合之前传代。在第一次传代和后续传代时，使用含有适当选择性抗生素的生长培养基。
此Protocol适用于悬浮细胞系，如Jurkat、THP-1等。
1. 在37°C水浴中旋转冷冻的细胞Thaw Medium约60秒。细胞解冻后（可能略快或略慢于60秒），立即将冻存管内的细胞迅速转移到含有10 ml预热Thaw Medium（不含选择性抗生素）的离心管中。如果将细胞长时间留在37°C的水浴中会导致活力迅速丧失。
步骤1的替代方法：解冻后立即将冻存管内的细胞快速转移到一个空的50 ml锥形管中，然后慢慢滴加10 ml预热的Thaw Medium，同时轻轻摇动锥形管，以实现温和混合，避免渗透冲击。
2.立即以300 g离心5分钟，去除培养基，并将细胞重悬于5 ml预热的Thaw Medium中（无选择性抗生素）。
3. 将重悬的细胞转移到一个T25瓶中，并在37°C、5% CO2的培养箱中孵育。
4. 培养24小时后，检查细胞活力。对于T25瓶，添加3-4 ml Thaw Medium（无选择性抗生素），并继续在37°C、5% CO2的培养箱中培养，直到细胞准备好传代。
5. 细胞应在密度达到约2 x 10^6 细胞/ml之前传代。在第一次传代和后续传代时，使用含有适当选择性抗生素的生长培养基。
此Protocol适用于适用于冷冻保存的PBMC或纯化的T细胞等。
1. 在37°C水浴中旋转冷冻的细胞冻存管，直到冻存管中细胞90%解冻。
注意：将细胞长时间留在37°C的水浴中会导致活力迅速丧失。
2. 用70%乙醇清洁冻存管外部。
3. 细胞解冻后，立即将冻存管的全部细胞迅速转移到一个15 ml管中。
4. 用Thaw Medium10 (#79704)冲洗冻存管，以回收更多细胞。
5. 缓慢加入10 ml预热的Thaw Medium 10 (#79704)。
6. 通过倒置试管轻轻混合。
7. 立即以200g离心10分钟，在室温下进行。
8. 用移液器小心地去除上清液，避免扰动沉淀。
9. 将沉淀重悬于10 ml预热的Thaw Medium 10 (#79704)。
10.通过倒置试管轻轻混合。
11.以200g离心10分钟，在室温下进行。
12.用移液器小心地去除上清液，避免扰动沉淀。
注意：在洗涤步骤中可能会损失高达20%的细胞。
13. 细胞现在可以用于下游应用。
细胞冻存是细胞生物学的基石，对于维持细胞系的健康和稳定性至关重要。冷冻细胞有多项好处，包括减少连续培养维护的需要，降低成本和劳动强度，有利于细胞系的转运，实现长期存储，最小化因反复传代导致的细胞系变异等。
Tips
为了获得最佳效果，可以使用BPS Bioscience验证和优化的培养基。
当接收到新的细胞系时，建议扩增细胞并在早期传代时至少冻存10管以备将来使用。
该Protocol适用于贴壁细胞系（如HEK293，CHO或HeLa细胞）。
1. 吸出培养基，用无Ca2+和Mg2+的磷酸盐缓冲盐水（PBS）洗涤细胞，并用0.05%的胰蛋白酶/EDTA或其他解离液将细胞从培养皿中消化下来。
2. 细胞分离后，加入生长培养基并计数细胞。
3. 以300 x g离心5分钟，去除培养基，并将细胞重悬于4°C的Cell Freezing Medium (#79796)，密度约为2 x 10^6细胞/ml。
4. 将1 ml细胞分装到适当的冻存管中。再将冻存管放入隔热容器（如程序/梯度降温盒）中进行缓慢冷却，并在-80°C过夜存放。
5. 第二天将冻存管转移到液氮中进行存储。
此Protocol适用于悬浮细胞系，如Jurkat、THP-1等，或外周血单个核细胞（PBMC）。
1. 以300 x g离心5分钟，去除培养基，并将细胞沉淀重悬于4°C的Cell Freezing Medium (#79796) ，密度约为2 x 10^6 细胞/ml。
2. 将1 ml细胞分装到适当的冻存管中。再将冻存管放入隔热容器（如程序/梯度降温盒）中进行缓慢冷却，并在-80°C过夜存放。
编译自
1.https://bpsbioscience.com/protocols
